La secuenciación de los ácidos nucleicos es el proceso de determinación de la secuencia de nucleótidos que componen una molécula de ADN o de ARN y que se representa por las iniciales de las bases nitrogenadas que portan.
Evolutivamente, desde los inicios de las técnicas de hibridación a principios de los 80, hasta la actualidad se han desarrollado las siguientes técnicas:
- Técnicas manuales basadas en reacciones químicas o enzimáticas (Maxam y Gilbert/Sanger).
- Secuenciaciones automáticas basadas en el método de Sanger ( 1ª, 2ª y 3ª generación) ; obtención de electroferogramas.
- Pirosecuenciación ( Detección óptica)
Secuenciación química de Maxam-Gilbert. El fragmento de ADN que se desea secuenciar se desnaturaliza (1), se marca el extremo 5' con radiactividad (2), la muestra se divide en cuatro alícuotas que son tratadas con diferentes reactivos químicos que cortan al ADN en bases específicas (A, t, C, G) (3), en cada alícuota, queda una colección de fragmentos de ADN de diferente tamaño que termina en una base específica. Los fragmentos se separan electroforéticamente en un gel de poliacrilamida (4) y se visualizan y analizan por medio de una radiografía (5).
ELECTROFEROGRAMAS
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